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生化分析儀-樣品量、試劑量與稀釋量設(shè)置方法
生化分析儀-樣品量、試劑量與稀釋量設(shè)置方法
加入時(shí)間：2014-05-14 15:07:25 當(dāng)前新聞點(diǎn)擊率：4241
生化分析儀有關(guān)參數(shù)包括樣品量、試劑量、稀釋水量、最小反應(yīng)體積和最大比色杯容量等。如HITACHI7170反應(yīng)體積180~380μl，最大體積570μ l。BT 224半自動(dòng)生化儀流動(dòng)比色池容積33μl，吸液量200～990μl，最適體積500μl。
1．最小反應(yīng)體積 在醫(yī)療設(shè)備光度讀數(shù)要用于結(jié)果計(jì)算時(shí)，反應(yīng)液液面高度不低于光度計(jì)光徑的最小體積。它保證儀器的正確讀數(shù)和計(jì)算，也是儀器測(cè)定精度和經(jīng)濟(jì)性的指針之一。在有的儀器中，它以反應(yīng)體積的下限表示，有的則專門標(biāo)明最小反應(yīng)體積。在單試劑測(cè)定中，樣品與試劑的總體積不得少于此參數(shù)。在雙試劑測(cè)定中，若R1與樣品的反應(yīng)讀數(shù)不納入結(jié)果計(jì)算。R1自勺加液量可不考慮此參數(shù)，如連續(xù)監(jiān)測(cè)法；否則應(yīng)考慮它對(duì)結(jié)果的影響，如終點(diǎn)法在加R2之前讀數(shù)，并以此來扣除試劑或樣品空白時(shí)。
在半自動(dòng)生化儀中，最適吸人量相當(dāng)于最少反應(yīng)體積。它與進(jìn)液管道長(zhǎng)度、流動(dòng)比色池容積，吸液泵抽吸力大小和液體黏稠度有關(guān)，它要保證光度檢測(cè)不受空泡和前后樣品攜帶污染的干擾。因此，吸人體積不能任意降低，必要時(shí)，應(yīng)加大反應(yīng)液量和吸人量。
2．最大比色杯容量 這個(gè)參數(shù)含義明確。在有的儀器中，它以反應(yīng)體積的上限表示，有的則專門標(biāo)明最大比色杯容量。反應(yīng)液超過此體積，將致液體外溢，儀器測(cè)定系統(tǒng)被污損。
3．樣品試劑比例樣品與試劑的比例(SV：RV)，也可表示為樣品體積分?jǐn)?shù)——樣品體積與反應(yīng)液總體積的比值(SV／TV)，是方法學(xué)基本參數(shù)。酶活力測(cè)定中，樣品在總體積中的比例應(yīng)在10％以下。一般來說，待測(cè)物質(zhì)在樣品中含量低的、生理波動(dòng)范圍大的，樣品用量較大。如Trinder反應(yīng)測(cè)定血清葡萄糖、膽固醇等，樣品試劑比例多為1：1OO，測(cè)定血尿酸或高密度脂蛋白膽固醇，常增加為1：50；ALT和AST的樣品試劑比例多為1：1O至1：20。方法靈敏、吸光度高的實(shí)驗(yàn)方法，樣品試劑比例小,如白蛋白BCG法，樣品試劑比例常為1：200。肌酐Jaffe氏法監(jiān)測(cè)時(shí)間短、吸光度值較低，樣品試劑比例多為1：10。一般應(yīng)以試劑說明為準(zhǔn)，不宜輕易改動(dòng)。
(1)改動(dòng)樣品試劑比例，影響一系列方法學(xué)參數(shù)。若比例增大，則線性范圍縮小，線性反應(yīng)時(shí)間縮短，樣品內(nèi)源性干擾、基質(zhì)效應(yīng)增加、旁路反應(yīng)會(huì)增強(qiáng)，方法特異性也下降。若比例減少，檢測(cè)信號(hào)偏低，信噪比(噪音／信號(hào))增大，當(dāng)儀器精度不高時(shí)，會(huì)加大測(cè)量誤差。
(2)改動(dòng)樣品試劑比例，對(duì)某些反應(yīng)有影響。如堿性磷酸酶(AI_P)，有文獻(xiàn)報(bào)道：當(dāng)樣品試劑比例從1：25降至1：50時(shí)，酶活力測(cè)定值增加，再低于1：50時(shí)不再增加。這一效應(yīng)可能是較高稀釋度下AIJP多聚體解聚的結(jié)果。體液樣品稀釋也可能對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生影響：④大多數(shù)蛋白質(zhì)在濃溶液中的分子構(gòu)象比稀溶液中穩(wěn)定，樣品稀釋可影響酶的穩(wěn)定性。(2)降低樣品中內(nèi)源性抑制劑或激動(dòng)劑的濃度，如以蒸餾水稀釋血清，可能因降低血清中淀粉酶的激動(dòng)劑氯離子的濃度，致測(cè)定淀粉酶結(jié)果偏低；隨血清稀釋倍數(shù)增加，肌酸激酶測(cè)定活力增加，可能與降低樣品中AMt，、胱氨酸等內(nèi)源性抑制劑有關(guān)。
(3)雙試劑時(shí)要兼顧R1、R2和樣品三者的比例，尤其不宜改動(dòng)試劑間的比例。R2要考慮儀器規(guī)定的加液最小體積，同一試劑瓶死體積下分液量小而浪費(fèi)大的經(jīng)濟(jì)問題等。
4．稀釋(水)量在加樣或加試劑時(shí)，加入去離子水或可以指定的液體。它的主要用途有兩個(gè)。一是用于濃縮試劑的稀釋，或樣品、校準(zhǔn)品的稀釋。二是在樣品加量小的時(shí)候用來沖洗樣品探針，減小攜帶誤差；但用量不宜太多，以免稀釋試劑影響反應(yīng)。要把稀釋水量納入樣品試劑比例和反應(yīng)液總體積考慮。必要時(shí)，干粉試劑復(fù)溶也要考慮此因素。
