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影響核酸提取效率的主要因素有哪些？
影響核酸提取效率的主要因素有哪些？
加入時間：2021-09-30 16:17:19 當(dāng)前新聞點擊率：1299
全自動核酸提取儀即是基于磁珠提取法研制而成的一套高通量、高靈敏度的自動核酸純化提取設(shè)備。它可在短時間內(nèi)利用機器磁棒架上的磁棒，將吸附有核酸的磁珠移動至不同的試劑孔內(nèi)，經(jīng)過細胞裂解、核酸吸附、清洗與洗脫，之后得到高純度核酸。 一般核酸提取的主要步驟分為四步：裂解、吸附、洗滌和洗脫，每一步出現(xiàn)問題都會影響磁珠的提取效率。下面就具體介紹一下影響核酸提取效率的一些因素。 一、樣本裂解是裂解細胞或病原體，釋放里面的核酸。影響裂解的主要因素有裂解液的成分及裂解的溫度和時間。 裂解液成分：對于一些難裂解的樣本，可以通過提高胍鹽濃度以及表面活性劑濃度來增強裂解液的裂解能力。 裂解溫度和時間：提高溫度和增加裂解時間可以讓細胞裂解更徹底，得到更多核酸，需要摸索合適的溫度和時間；溫度過高或時間過長，也有可能導(dǎo)致核酸斷裂或醇類揮發(fā)導(dǎo)致的提取效率下降。 二、吸附是磁珠吸附核酸的能力，影響吸附能力的有磁珠的吸附能力以及結(jié)合緩沖液的結(jié)合能力。磁珠吸附能力受到磁珠比表面積以及修飾基團的密度影響。可根據(jù)實際樣本選擇磁珠粒徑和修飾基團。
三、洗滌是去除DNA以外的RNA、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。關(guān)系到核酸的純度，磁棒的振蕩幅度和混合時間會影響洗滌效率。磁棒振蕩幅度太小或混合時間太短，有雜質(zhì)殘留在磁珠上會影響磁珠吸附核酸的能力。振蕩太劇烈或時間太長，會丟失部分核酸或造成核酸的斷裂、降解，得率下降。 四、 洗脫是解離吸附在磁珠上的DNA，得到純度和濃度均很高的DNA，直接影響核酸得率，影響洗脫效率的因素有磁珠的干燥程度以及洗脫溫度和時間。磁珠未充分晾干，可能會有醇類等雜質(zhì)殘留，影響后續(xù) PCR 反應(yīng)；磁珠過分干燥，核酸可能會干結(jié)在磁珠上，導(dǎo)致洗脫效率下降。適當(dāng)提高洗脫溫度和時間，有利于核酸從磁珠上游離下來，時間過長或溫度過高，核酸有可能會降解，需要把握其中的平衡。 全自動核酸提取儀能夠?qū)崿F(xiàn)自動化、高通量操作，適用于疾病控制中心、臨床疾病診斷、輸血、出入境檢驗檢疫、食藥監(jiān)、法醫(yī)學(xué)鑒定、環(huán)境微生物檢測、食品檢測、教學(xué)、科研、畜牧業(yè)和分子生物學(xué)研究等多種領(lǐng)域，尤其是對各地區(qū)爆發(fā)疫情需大規(guī)模核酸檢測起著至關(guān)重要的作用。 |
