酶標儀使用過程中幾個常犯錯誤
加入時間：2014-06-11 09:50:37 當前新聞點擊率：2923
酶標儀自面世以來一直起著至關(guān)重要的作用，通過多年的發(fā)展，該醫(yī)療設(shè)備在功能上也發(fā)生了較大變化，但是其基本功能不外乎一個比色測定，所不同的是在測定波長范圍、吸光度范圍、光學系統(tǒng)、檢測速度、震板功能、溫度控制、定性和定量測定軟件功能等方面的差異，當然全自動酶免疫分析系統(tǒng)還具有自動洗板、溫育、加樣等功能。在臨床實驗室實際工作中，實驗人員在使用酶標儀進行測定操作時，有時難免會對酶標儀的一些性能指標產(chǎn)生迷惑，甚至對酶標儀的應用產(chǎn)生錯誤的理解。如諸如使用酶標儀較用肉眼觀察測定的陽性率明顯增加這樣的問題。
一、測定波長目前國內(nèi)常見的ELISA試劑盒所使用的標記用酶均為辣根過氧化物酶（HRP），底物通常為四甲基聯(lián)苯胺（TMB）和鄰苯二胺（OPD），其在過氧化氫溶液的存在下，經(jīng)HRP作用，分別氧化為2,2,-二氨基偶氮苯（DAB）和聯(lián)苯醌。當pH值為5.0左右時，DAB在450nm波長處有最大吸收，當pH值降為L 0時，最大吸收波長移至492 nm,同時摩爾消光系數(shù)變大，顯色加深，因而常用強酸如硫酸或鹽酸終止反應。TMB的氧化產(chǎn)物聯(lián)苯醌在波長450nm處有最大消光系數(shù)，如果HRP量少，H:O:和TMB過量時，則形成藍色的陽離子根。
二、測定的吸光度范圍 通常酶標儀的吸光度測定范圍在。0-2.5之間即可以滿足ELISA的測定要求。早期的酶標儀可測定的吸光度一般在0-2.5之間，但現(xiàn)在基本上都做了拓寬，可達到3.5以上，并且能保持很好的精密度與線性。如Labsystems公司Dragon Wellscan MK-2的吸光度測定范圍為0-3.5，而Multiskan Ascent的吸光度測定范圍（Abs）達0-4.0，在0-4.0范圍，線性誤差不超過±2.0%，在0.3-3.0吸光度范圍內(nèi)，測定精密度CV小于±0.2%；3.0-4.0 Abs范圍內(nèi)，測定精密度CV小于士0.2%。因此，對于酶標儀的吸光度范圍不必去刻意追求大的吸光度范圍，主要要看在一定的吸光度范圍內(nèi)的線性和精密度如何。
三、光學系統(tǒng) 酶標儀的光學系統(tǒng)采用的是垂直光路多通道（通常為8或12通道，亦有單通道）檢測，一般為硅光管或光導纖維，除測定通道外，有的酶標儀還有一個參比通道，每次測定可進行自我校準。酶標儀的光學系統(tǒng)功能如何，均可通過酶標儀測定的吸光度范圍、線性度、精密度和準確度等體現(xiàn)出來。光學系統(tǒng)好的話，則上述指標也應較佳。測定的精密度與測定通道之間的均一性有直接關(guān)系。單通道可避免因通道不同所致的差異。
