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醫(yī)療動態(tài)
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白細(xì)胞分類計數(shù)方法在血細(xì)胞分析儀中的發(fā)展應(yīng)用
白細(xì)胞分類計數(shù)方法在血細(xì)胞分析儀中的發(fā)展應(yīng)用
加入時間：2014-06-04 10:34:59 當(dāng)前新聞點(diǎn)擊率：2379
隨著高新技術(shù)的不斷出現(xiàn)，血細(xì)胞分析儀在檢測技術(shù)方面發(fā)生了較大變化，其中白細(xì)胞分類計數(shù)已由電阻抗法的三分類發(fā)展為同時使用多項技術(shù)聯(lián)合檢測白細(xì)胞，再由醫(yī)療設(shè)備綜合分析各項數(shù)據(jù)，可得出較正確的分類結(jié)果。這些技術(shù)包括體積分析、激光分析、高頻傳導(dǎo)分析、光散射分析和細(xì)胞化學(xué)等，但目前所用的普通血細(xì)胞分析儀仍不能對某些細(xì)胞進(jìn)行正確識別，如白血病細(xì)胞、單核細(xì)胞、異常不典型淋巴細(xì)胞等。各類五分類血細(xì)胞分析儀的質(zhì)量保證有賴于參考方法的建立。目前，白細(xì)胞分類計數(shù)的參考方法仍然是手工分類法，即將血涂片進(jìn)行瑞氏染色后，在顯微鏡下對各種白細(xì)胞進(jìn)行分類。
Hiibl等研究了使用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行白細(xì)胞五分類法，這種方法使用了三種熒光染料標(biāo)記的單克隆抗體對不同白細(xì)胞進(jìn)行染色：FITC標(biāo)記的抗CD45,PE/CYS標(biāo)記的抗CD14，PE標(biāo)記的抗CD2、抗CD16、抗HLA-DR單克隆抗體混合物。根據(jù)各種白細(xì)胞表面抗原分布的不同對白細(xì)胞進(jìn)行分類。
染色前先用細(xì)胞稀釋液破壞紅細(xì)胞，白細(xì)胞因表達(dá)CD45而與細(xì)胞碎片區(qū)分開。嗜酸性和嗜堿性粒細(xì)胞不能被PE標(biāo)記的單克隆抗體混合物染色或染色較淺，且CD14陰性，而與其他細(xì)胞相區(qū)分，被框進(jìn)LSS(側(cè)向光散射)/CD45直方圖內(nèi)。在LSS/CD45直方圖內(nèi)嗜酸性和嗜堿性粒細(xì)胞因表達(dá)CD45的強(qiáng)度不同及側(cè)向光散射特征存在差異而被分開。單核細(xì)胞表達(dá)CD14，同時結(jié)合其側(cè)向光散射特征而被框進(jìn)LSS/CD14區(qū)。單核細(xì)胞以外的細(xì)胞根據(jù)側(cè)向和前向光散射（FS）特征差異而在LSS/FS直方圖中分為兩群，一群包括淋巴細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞，另一群包括中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞。從淋巴細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞中減往嗜堿性粒細(xì)胞即為淋巴細(xì)胞，從總數(shù)（100％）中減往嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞相對數(shù)，即得中性粒細(xì)胞相對數(shù)。
根據(jù)CD14區(qū)分單核細(xì)胞時，有少量CD14陰性單核細(xì)胞可被漏檢，而在區(qū)分嗜酸性粒細(xì)胞時，排除中性粒細(xì)胞是根據(jù)中性粒細(xì)胞表達(dá)CD16，若存在大量CD16弱表達(dá)的成熟中性粒細(xì)胞，則這部分中性粒細(xì)胞會干擾嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)，使嗜酸性粒細(xì)胞結(jié)果偏高，這種情況主要見于炎癥反應(yīng)。研究還發(fā)現(xiàn)，選擇不同的標(biāo)本處理方法和流式細(xì)胞儀，固然所得結(jié)果相關(guān)性較好，但不同細(xì)胞亞群計數(shù)結(jié)果間的差異具有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義，這體現(xiàn)了方法學(xué)選擇的重要性。流式細(xì)胞儀白細(xì)胞五分類法綜合運(yùn)用多種細(xì)胞表面標(biāo)志和光散射特征對白細(xì)胞進(jìn)行識別，具有較高的特異性，其計數(shù)結(jié)果與手工分類法相關(guān)性較好，而且重現(xiàn)性遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于手工分類法，有看成為白細(xì)胞分類計數(shù)的參考方法。
