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醫(yī)療動態(tài)
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國產(chǎn)血細胞分析儀中血小板計數(shù)方法
國產(chǎn)血細胞分析儀中血小板計數(shù)方法
加入時間：2014-06-04 10:28:49 當前新聞點擊率：2308
血小板計數(shù)的干擾因素較多。細胞碎片、顆粒雜質(zhì)、血小板聚集等都可對血細胞分析儀檢測結(jié)果造成偏差。血小板計數(shù)傳統(tǒng)的參考方法是目視計數(shù)法，即將血液用草酸銨溶液稀釋后，充進牛鮑計數(shù)板，在相差顯微鏡下計數(shù)血小板。該種檢測方法的重現(xiàn)性差，變異系數(shù)（CV）可達10%－25%，已不適于先階段血細胞分析儀的使用，單通道粒子計數(shù)儀由于重合計數(shù)和干擾信號的影響較大，常使結(jié)果偏高（特別是在低血小板時），也不適于作為參考方法，這一度成為醫(yī)療設備發(fā)展的難題。
近年來，對血小板計數(shù)方法的研究較多，建立正確度及精密度更高的血小板計數(shù)的參考方法，不僅可進一步發(fā)展血細胞分析儀儀，還可減少臨床上預防性輸注血小板的應用。不少學者以為，假如血小板計數(shù)結(jié)果可靠，進行血小板輸注的閾值可由目前的20×109/L降至5×109/L，這可大大減少血小板輸注的用度。
Dickerrhoff等研究了以乳膠顆粒作為校準物計數(shù)血小板的方法，即用單克隆抗體標記血小板，在一定量血液中加進一定量熒光素（FITC）標記的乳膠顆粒，用流式細胞儀計數(shù)血小板對乳膠顆粒的比值，再以該比值乘以已知的乳膠顆粒的濃度即為血小板濃度。該法正確度和精確度較高，CV值為5.3%－5.6%，但在吸取和稀釋標本、加進乳膠顆粒時，需要正確吸樣，否則會帶來操縱誤差。
現(xiàn)行的血小板計數(shù)的參考方法是ICSH制定的PLT/RBC比值法，即以紅細胞代替乳膠顆粒作為校準物，計數(shù)PLT/RBC值，通過ICSH參考方法計數(shù)紅細胞濃度，再以PLT/RBC比值乘以紅細胞濃度即為血小板濃度。PLT/RBC比值法相對較易進行，其主要優(yōu)點在于，對一個混勻的血標本，吸樣和稀釋標本不會使結(jié)果產(chǎn)生誤差。一般以為，標本作1:1000稀釋，流式細胞儀測定3000個信號/秒時，為血小板計數(shù)的最佳條件，并可不進行重合計數(shù)的校正。
目前標記血小板所用的單克隆抗體包括抗CD41a(GPⅡb/Ⅲa) 、抗CD41(GPⅡb)、抗CD42a(GPⅠb/Ⅸ)、抗CD42b(GPⅠb)、抗CD61(GPⅢa)等，由于GPⅠb/Ⅸ在血小板激活時會轉(zhuǎn)進血小板開放管道系統(tǒng)，而導致其在血小板膜上的分布減少，這限制了CD42a和CD42b的應用。而GPⅡb/Ⅲa性質(zhì)較穩(wěn)定，很少發(fā)生再分布，其兩個抗原決定簇也很少同時被封閉，故目前一般同時使用抗CD41和抗CD61對血小板進行標記。在標記的血小板中，較大的血小板團可根據(jù)前向和側(cè)向光散射特征加以區(qū)分。
計數(shù)血小板所用容器應當用聚丙烯或聚苯乙烯材料，以避免血小板粘附，所用流式細胞儀要能同時進行光散射和熒光丈量。之所以要通過PLT/RBC比值計數(shù)血小板，是由于目前流式細胞儀還只能對細胞進行相對計數(shù)，而不能進行盡對計數(shù)。
