血細胞分析儀中紅細胞和白細胞檢測方法
加入時間：2014-06-03 14:37:03 當前新聞點擊率：1972
血細胞分析儀是血液學常規(guī)檢查必備醫(yī)療設備之一，對血液系統(tǒng)及其相關疾病的診斷和治療十分重要。由于血細胞分析儀的計數結果重現性好、正確，操縱簡便、快速，已成為當今臨床實驗室全血細胞計數的主要檢測手段。但目前的自動化血細胞分析儀被以為是非直接計數的儀器，在使用時須對其進行校準，才能保證其分析結果的正確性，而校準血細胞分析儀所測參數需用相應的參考方法。
按照國際血液學標準化委員會(ICSH)的定義，參考方法是“已被清楚而確切地描述、用于某一特定檢測的方法，它可以按照指定權威機構的判定，提供正確度和精密度足夠高的試驗數據，以對該檢測的其他實驗室方法進行評估。參考方法應遵循基本的計量學標準，其正確度必須通過與現有的一種確定方法相比較而確定，并且必須明確指出其不精確度和不正確度”。除用于評價常規(guī)方法和校正儀器外，參考方法也可用于質控品定值及鑒定商品試劑盒等。與常規(guī)方法相比，參考方法的干擾因素少，系統(tǒng)誤差小，相對于常規(guī)方法可忽略不計，因其技術要求較高且用度較昂貴，在常規(guī)臨床實驗室應用未幾，但對保證常規(guī)方法結果的可靠性非常重要。目前，ICSH和美國臨床檢驗標準化委員會(NCCLS)已經建立了紅細胞和白細胞計數、血紅蛋白測定、紅細胞壓積測定、網織紅細胞計數、血小板計數及白細胞分類計數的參考方法?，F對這些參考方法及其應用予以簡述。
紅細胞和白細胞計數傳統(tǒng)的參考方法是直接計數法，即在計數池內對稀釋血液進行的紅細胞和白細胞直接計數。由于血液稀釋的正確性和充池的一致性不易把握，結果會產生較大的誤差，且當細胞濃度過低時難以得到正確的結果。該法在一般臨床實驗室中計數紅細胞的不精密度（CV）可達5%~10%，而在生理條件下計數白細胞的CV值為6％－9％，已不適于作為參考方法。ICSH推薦使用電阻抗法半自動單通道細胞計數儀計數代替?zhèn)鹘y(tǒng)的直接計數法，并在1994年對此進行了修訂，將其確定為參考方法。
現行紅細胞和白細胞計數的參考方法，是將血液稀釋一定倍數后用ICSH推薦的計數儀計數一定體積內的細胞數，并換算成每升血液內的細胞數。計數白細胞時，用白細胞稀釋液溶解紅細胞。標本是用EDTAK2抗凝的靜脈血，EDTAK2的終極濃度為1.5－2.2mg/ml。測定時不能用溶血或有微凝塊的標本。同時，盛血容器體積要合適，以有足夠的空間混勻血液。測定前將容器輕輕倒轉幾次混勻血液，但不能用旋渦混勻器。計數儀通道直徑80－100μm，通道長度為直徑的70%－100%，儀器信噪比大于100:1。
稀釋標本時應使用符合國家標準的容量瓶，計數白細胞時要用稀釋液將紅細胞完全溶解。除標本采集，標本運輸及標本稀釋可使結果產生誤差外，丈量時的誤差來源主要包括吸進血液的體積不準、通道內細胞再循環(huán)、細胞粘附、假信號以及重合計數等。重合計數為主要的誤差來源，目前多通過回回分析方法進行校正，假信號則通過設置閾值進行消除。
