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常規(guī)款全自動生化分析儀的參數(shù)設置方法
常規(guī)款全自動生化分析儀的參數(shù)設置方法
加入時間：2014-05-05 16:19:25 當前新聞點擊率：2400
1.線性范圍
按試劑的質(zhì)量而設置，超過范圍應增加樣品量或稀釋后重測。不同試劑公司的試劑質(zhì)量不一樣，不同樣品試劑比的線性范圍也不一樣，應實測試劑盒的線性范圍。終點法可配制系列不同濃度的標準液，按分析項目的波長、樣品量、試劑量、孵育時間，測定各濃度的吸光度，繪制標準曲線，在線性內(nèi)的最高濃度為線性上限。這樣可以確保全自動生化分析儀檢測的準確性。
2. 溫度
一般生化分析儀的恒溫控制器可以對25℃、30℃、37℃三種溫度進行恒溫，根據(jù)需要可以任意選擇。由于酶在達到最適溫度以前，溫度每升高10℃，反應速率增加1-2倍，因此IFCC推薦酶測定時的溫度設置為37℃。
3.波長
3.1 單波長
當測定體系中含有一種組分或在混合溶液中待測組分的吸收峰與其他共存物質(zhì)的吸收波長無重疊時，可選用。假如一個物質(zhì)有幾個吸收峰，可選用吸光度最大的一個波長，或者選擇在吸收峰處吸光度隨波長變化較少的某個波長。
3.2 雙波長
當被檢溶液混濁或存在較多的干擾物質(zhì)時，測定時會出現(xiàn)光散射和非特異性光吸收，從而影響測定結果的正確性，此時可用雙波長測定，以進步測定結果的正確性，而在實際應用中選擇輔助波長主要用于消除脂血、溶血、黃疸的干擾。由于脂質(zhì)、血紅蛋白、膽紅素在較寬的波長范圍內(nèi)有較強的光吸收，經(jīng)常同測定波長有重疊，此時測得的吸光度包含待測物質(zhì)的吸光度和干擾物質(zhì)的吸光度，因此選用合適的輔助波長可以消除干擾物質(zhì)的吸光度。輔助波長的設置原則是根據(jù)測定波長選擇輔助波長，要求干擾物質(zhì)在測定波長同輔助波長有相同的吸光度。
4. 樣品量和試劑量
樣品和試劑量的設置原則一般是根據(jù)試劑說明書上的比例，并結合醫(yī)療設備的特性進行設置。醫(yī)療設備的特性包括：樣品和試劑的最小加樣量及加量范圍、最小反應液的體積等。在實際工作中為節(jié)約本錢可以根據(jù)比例縮小樣品和試劑用量，但同時必須滿足最小反應液總量。但值得留意的是，樣品量不應少于3μl，否則測試結果的重復性差。
5. 稀釋水量
添加樣品稀釋水的目的是為了洗出粘附在采樣針內(nèi)壁上的微量血清，減少加樣誤差，添加試劑稀釋水的為了避免試劑間交叉污染，兩種稀釋水的量應在復溶試劑時按比例扣除。如用液體試劑盒時因不再加水，無法扣除稀釋水量，所以兩種稀釋水的量應盡量減少，以免試劑被過量稀釋。
6. 孵育時間
在終點分析法中，孵育時間的選擇應充分考慮到干擾題目。在白蛋白溴甲酚綠法中，血清中α1-球蛋白、轉鐵蛋白、觸珠蛋白等亦可與溴甲酚綠呈色，但其反應速率較白蛋白為慢，而實際上，當血清與白蛋白混合時，“慢反應”已經(jīng)發(fā)生，因此在溴甲酚綠與血清混合后30s讀吸光度可明顯減少非特異性結合反應。在葡萄糖氧化酶法中，葡萄糖氧化酶高特異性催化β-D-葡萄糖，而血清中葡萄糖α和β構型各占36%和64%，要使葡萄糖完全反應，必須延長孵育時間使α-葡萄糖變旋為β構型。此外，總膽固醇、甘油三酯都采用酶法的Trinder反應進行測定，但該反應37℃反應較慢，必須測定這些酶試劑反應達到終點的時間，自動分析儀用試劑盒一般可以在全部加樣后5min內(nèi)反應完全，所以應該選擇分析儀的最大反應時間。
7. 延遲時間
在酶促反應一開始的階段，由于各種因素的影響，酶促反應速率比較慢，可以是幾秒到幾分鐘，尤其是雙底物反應或需要輔酶參與者，通常為1-3min。而一般單試劑法只需30s，常用項目中丙氨酸氨基轉移酶、天冬氨酸氨基轉移酶、肌酸激酶需要特別留意。
8. 監(jiān)測時間
酶促反應延滯期后，在過量底物的存在下，反應速率加快并達到一個反應速率穩(wěn)定的階段，即酶促反應以恒定的速率進行，不受底物濃度的影響，這段時間稱為線性反應期或零級反應期，自動化生化分析儀的監(jiān)測時間即為此期。測酶的連續(xù)監(jiān)測法至少90-120s或至少4點（3個ΔA），少于3個ΔA不能稱為連續(xù)監(jiān)測法，由于不能計算線性度。監(jiān)測時間過長則輕易發(fā)生底物耗盡，可測范圍變窄。
9. 試劑吸光度上限、下限
試劑吸光度上限為正向反應用，可參考試劑盒說明書數(shù)值折算成所用比色杯的光徑。如試劑盒要求上限為0.4，比色杯光徑0.8cm，則試劑吸光度上限設置為0.32。
試劑吸光度下限為負向反應用，設置法同試劑吸光度上限。
超過限額表示試劑已變質(zhì)，應更換合格試劑。
10.底物耗盡限額
不同型號分析儀的設計不一樣，有的為零點與監(jiān)測第一點吸光度的差額，有的為吸光度上升或下降至指定吸光度的數(shù)值。超過限額說明樣品的酶活性非常高，底物消耗太快，在儀器程序規(guī)定的線性反應期內(nèi)吸光度的變化往往不代表真正的酶活力，導致結果偏低，樣品應稀釋5-10倍后重測。
11.線性度
線性度是指“線性錯誤”或“線性誤差”，其計算公式為：（A1-A2）/A3 × 100%，式中：A1為前2/3讀數(shù)時間的斜率，A2為后2/3讀數(shù)時間的斜率，A3為總的斜率。線性百分數(shù)大，說明ΔA之間已不成線性，超過限額說明底物不足，檢測結果會變低，應稀釋后重測。
12.試劑空缺速率
試劑空缺速率為試劑在監(jiān)測過程中底物自動降解得到的結果。其值為以水代樣品測得的項目結果，樣本測定結果應扣除試劑空缺速率。
