國內(nèi)生化分析儀常用分析方法簡介
加入時間:2014-05-05 16:06:47 當前新聞點擊率:2213
生化分析儀常用分析方法可分為三大類,分別為終點法、固定時間法和動力學法。這也是這款醫(yī)療設(shè)備的發(fā)展史,下面普朗小編對這三種方法進行一個簡介:
終點法: 指經(jīng)過一段時間的反應(yīng),反應(yīng)達到平衡,由于反應(yīng)的平衡常數(shù)很大,可認為全部底物(被測物)轉(zhuǎn)變成產(chǎn)物,反應(yīng)液的吸光度不再變化,只與被測物的濃度有關(guān)。這類方法通常稱為“終點”法,更確切地說應(yīng)稱“平衡”法。
單試劑單波長終點法:t1時刻加入試劑(體積為V),t2刻加入樣本,(體積為S),然后攪拌并反應(yīng),之后開始測量反應(yīng)液的吸光度,在t3時刻反應(yīng)達到終點,t3-t2為測定時間。
反應(yīng)度R=At3-At2-1×V/(V+S),或R=At3-ARBLK。
其中: Ati為i時刻的吸光度,ARBLK為試劑空白吸光度。
雙試劑雙波長終點法: 基本上同“雙試劑單波長終點法”,只是對于每一個測定周期,其實際吸光度等于Aλ1-Aλ2。
固定時間法:又稱為一級動力學法、二點動力學法等,指在一定的反應(yīng)時間內(nèi),反應(yīng)速度與底物濃度的一次方成正比,即v=k[S]。由于底物在不斷的消耗,因此整個反應(yīng)速度在不斷的減小,表現(xiàn)為吸光度的變化越來越小。這類反應(yīng)達到平衡的時間很長,理論上可以在任意時間段進行監(jiān)測,但由于血清成份復(fù)雜,反應(yīng)剛啟動時反應(yīng)較復(fù)雜,雜反應(yīng)較多,必需經(jīng)過一段延遲時間才能進入穩(wěn)定反應(yīng)期。
動力學法:又稱零級動力學法,指反應(yīng)速度與底物濃度的零次方成正比,也就是與底物濃度無關(guān)。因此,在整個反應(yīng)過程中,反應(yīng)物可以勻速地生成某個產(chǎn)物,導致被測定溶液在某一波長下吸光度均勻地減小或增加,減小或增加的速度(ΔA/min)與被測物的活性或濃度成正比。動力學法也被稱為連續(xù)監(jiān)測法;主要用于酶活性的測定。
實際上,由于底物濃度不可能足夠大,隨著反應(yīng)的進行,底物消耗到一定程度后,反應(yīng)速度不再為零級,因此,零級動力學法是針對于特定時間段而言的;同樣,由于血清成份復(fù)雜,反應(yīng)剛啟動時反應(yīng)較復(fù)雜,雜反應(yīng)較多,必需經(jīng)過一段延遲時間才能進入穩(wěn)定反應(yīng)期,各試劑商對這兩段時間有嚴格規(guī)定。